博格隆亲和层析填料的种类与选择

  随着对生物药的纯度和质量发展要求日益增加，而生物分子种类慢慢的变多，结构越来越多样，样品自身的不稳定性以及成分的复杂性从而使得生物制药分离纯化的挑战增大。由于亲和层析介质具有高选择性、可放大性和易于工艺开发的优势，现在已经成为生物制药工业化生产的关键技术，这是一种根据生物分子之间的特异相互作用来分离物质的层析方法，如酶和底物的结合、受体和配体的结合、抗体和抗原的结合等。这类结合即是特异的，又是可逆的，通过这一种可逆的结合和分离来达到蛋白纯化的目的。

  Protein L可特异性结合抗体Kappa 轻链可变区，与 抗体结合后不影响抗原结合位点 ，与Protein A或Protein G相比，能更广泛地结合各种来源及亚类的抗体，如可结合IgG、IgM、IgA、IgE和IgD以及单链可变片段(scFv)和Fab片段，可从发酵液、动物腹水或血清中纯化抗体。

  His标签由多个组氨酸组成（通常为6个组氨酸），组氨酸残基中咪唑环的给电子体基团可与过渡金属形成配位键，一个Ni2+有六个配位位点，部分与络合剂鳌合，部分与蛋白结合，金属鳌合亲和填料常见的络合剂有：IDA 、NTA以及TED，分别拥有3、4、5个金属配位位点，因此TED抓捏能力最强，能耐受一定浓度的碱与EDTA，而IDA结合蛋白能力相对最强。除镍之外，金属螯合亲和层析介质还可鳌合Cu2+，Zn2+，Co2+等离子纯化含组氨酸、半胱氨酸和色氨酸侧链的蛋白质和多肽。

  蓝胶是以琼脂糖为基架，Cibacron Blue 3GA 为配基的亲和介质，Cibacron Blue 3GA属于蒽醌衍生物，结构中有氨基、磺酸基和苯基，除具有核苷酸特异性吸附作用外，也能够最终靠电荷以及疏水等作用与蛋白质进行非特异性结合。蓝胶已被大范围的应用于各种蛋白质的分离纯化领域，如脱氢酶、激酶、转移酶、血清白蛋白、干扰素及血浆蛋白等。

  亲和层析是下游工艺的关键步骤，应在温和的洗脱条件下有着优异的纯化表现，同时经得起严格的清洗和消毒过程。在筛选填料的过程中，为高效获得高产量高质量样品，应从基质与配基方面考虑，不一样的材质、粒径、孔径的基质适用于不同阶段的纯化过程，可从分辨率、流速、载量等方面出发；而正确的配基种类与密度则对目标物拥有非常良好的结合能力，同时具有相对温和的洗脱条件。

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